Tankoslojna hromatografija je metoda hemijske analize koja se temelji na upotrebi sloja sorbenta debljine 0,1-0,5 mm kao stacionarne faze. TLC metoda se može koristiti u raznim poljima i omogućava određivanje širokog spektra hemijskih spojeva.
Princip metode
Metoda tankoslojne hromatografije rođena je iz papirne hromatografije, a prvi eksperimenti izvedeni su 80-ih godina 19. veka. Aktivna upotreba ove analize započela je tek nakon 1938.
TLC tehnika uključuje mobilnu fazu (eluent), stacionarnu fazu (sorbent) i analit. Stacionarna faza se nanosi i učvršćuje na posebnoj ploči. Ploča može biti izrađena od stakla, aluminijuma ili plastike - to su podloge za višekratnu upotrebu koje se moraju temeljito oprati, osušiti i pripremiti za nanošenje sorbenta nakon svake upotrebe. Takođe je moguće koristiti papirne ploče koje se odlažu nakon upotrebe.
Silika gel se najčešće koristi kao stacionarna faza, ali moguće je koristiti i druge sorbente, na primjer, aluminijev oksid. Kada se koristi ovaj ili onaj sorbent, mora se strogo slijediti tehnologija kako bi rezultat bio precizan, na primjer, jer silikagel može dati netačan rezultat ako je zrak u laboratoriji previše vlažan.
Kao mobilna faza koriste se rastvarači, na primjer voda, sirćetna kiselina, etanol, aceton, benzen. Izbor otapala mora se uzeti odgovorno, jer rezultat hromatografije direktno ovisi o njegovim kvalitetama (viskoznost, gustina, čistoća). Za svaki analizirani uzorak odabire se pojedinačno otapalo.
Analiza
Uzorak se mora razrijediti u otapalu. Ako se ne dogodi potpuno otapanje i ostane previše nečistoća, tada se uzorak može očistiti ekstrakcijom.
Nanošenje uzorka na ploču može se izvršiti automatski ili ručno. Automatsko nanošenje koristi metodu mikro raspršivanja pri čemu se svaki uzorak raspršuje na odgovarajuće područje podloge. Za ručnu primjenu koristi se mikropipeta. Oznake olovke stavljaju se na tanjir za svaki uzorak. Svaki uzorak nanosi se kapilarom na ploču u jednoj liniji na dovoljnoj udaljenosti od oznaka kako ne bi reagovao sa ugljenom iz olova.
Ploča se stavlja u posudu na čije se dno ulije eluent. Nosač se postavlja jednim rubom u posudu do označene crte. Posuda je dobro zatvorena kako bi se izbjeglo isparavanje mobilne faze. Pod dejstvom kapilarnih sila, eluent počinje da se podiže slojem sorbenta. Kada eluent dosegne određeni nivo, ploča se izvadi iz posude i osuši.
Ako željena tvar nema boju, tada neće biti vidljiva na podlozi. Zbog toga se vrši vizualizacija - obrada ploče jodnom parom ili drugim bojama.
Nakon takve obrade, ocjenjuje se rezultat. Na sorbentu se pojavljuju obojena područja različitog intenziteta. Da bi se odredila supstanca (ili grupa supstanci), obojena područja, njihova veličina, intenzitet i pokretljivost uspoređuju se s referentnim uzorkom.
TLC metoda se široko koristi jer je brza, jeftina, tačna, intuitivna, ne zahtijeva složenu opremu i jednostavna je za tumačenje.
